Cy5-丝素蛋白红色荧光标记,Cy5-Silk fibroin,CAS:96690-41-4
Cy5-丝素蛋白红色荧光标记,Cy5-Silk fibroin,CAS:96690-41-4
名称:Cy5-丝素蛋白红色荧光标记,Cy5-Silk fibroin
CAS:96690-41-4
纯度:95%+
性状:基于不同的分子量,呈白色 / 类白色固体,或液体。
溶剂:溶于二氯甲烷、DMSO、水等常规有机溶剂。
储藏条件:-20°C干燥避光保存
包装规格:50mg 100mg 250mg 500mg(按需提供)
反应过程:将丝素蛋白溶解于 PBS 缓冲液中,配制成浓度为 1 - 5 mg/mL 的溶液。将 CY5 - NHS 酯溶解于无水 DMSO,制成 10 - 20 mM 的溶液。在磁力搅拌下,将 CY5 - NHS 酯的 DMSO 溶液缓慢滴加到丝素蛋白的 PBS 溶液中,CY5 - NHS 酯与丝素蛋白中赖氨酸残基的氨基等活性基团反应,二者摩尔比控制在 5 - 10:1。由于蛋白质分子较大且活性位点多,适当增加染料比例有助于充分标记。在 4℃下避光反应 12 - 16 小时,低温可减少蛋白质变性风险,避光防止 CY5 荧光淬灭。
产物分离:若使用透析法,反应结束后将反应液转移至透析袋中,用大量 PBS 缓冲液透析 24 - 36 小时,多次更换透析外液,去除未反应的 CY5 - NHS 酯和 DMSO。若使用超滤离心管,将反应液转移至超滤离心管中,以 3000 - 5000 rpm 的转速离心 10 - 15 分钟,去除小分子杂质,然后用 PBS 缓冲液多次洗涤截留物,每次洗涤后离心,重复 3 - 4 次。后收集纯化后的 Cy5 - Silk fibroin 溶液,可通过冷冻干燥得到固体产物。采用十二烷基硫酸钠 - 聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS - PAGE)分析产物纯度,用荧光分光光度计检测其荧光强度。
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