CY7-Insulin,荧光CY7标记胰岛素
CY7-Insulin,荧光CY7标记胰岛素
胰岛素是一种蛋白质,其分子表面含有多个可用于修饰的氨基酸残基,如赖氨酸的氨基、半胱氨酸的巯基等。首先,将胰岛素溶解在合适的缓冲溶液(如 pH 7.4 的磷酸盐缓冲液)中,形成均一的蛋白溶液。
对于 CY7 荧光染料,可选用 CY7 - 马来酰亚胺(CY7 - MAL),因其能与巯基特异性反应;若以赖氨酸的氨基为连接位点,则选用 CY7 - N - 羟基琥珀酰亚胺酯(CY7 - NHS)。这里以 CY7 - MAL 为例,将 CY7 - MAL 溶解在少量的有机溶剂(如 DMSO)中,避免其在水溶液中水解。
将 CY7 - MAL 溶液缓慢加入到胰岛素溶液中,在室温、避光条件下搅拌反应 4 - 6 小时。CY7 - MAL 中的马来酰亚胺基团会与胰岛素分子中半胱氨酸残基的巯基发生迈克尔加成反应,形成稳定的硫醚键,实现 CY7 对胰岛素的标记。
反应完成后,使用高效液相色谱(HPLC)对产物进行纯化。选择合适的色谱柱(如 C18 反相柱),以乙腈和水(含 0.1% 三氟乙酸)为流动相,通过梯度洗脱,将未反应的 CY7 - MAL、胰岛素聚集体及其他杂质与标记的 CY7 - Insulin 分离。收集含有目标产物的洗脱峰溶液,冷冻干燥得到 CY7 - Insulin 固体。通过质谱(MS)精确测定产物的分子量,验证 CY7 与胰岛素的连接;利用荧光显微镜观察 CY7 - Insulin 在细胞内的荧光分布,评估标记后胰岛素的生物活性和荧光性能。
名称:CY7-Insulin,荧光CY7标记胰岛素
纯度:95%+
性状:基于不同的分子量,呈白色 / 类白色固体,或液体。
溶剂:溶于二氯甲烷、DMSO、水等常规有机溶剂。
储藏条件:-20°C干燥避光保存
包装规格:50mg 100mg 250mg 500mg(按需提供)
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