比色法检测生物素/蛋白质摩尔质量比是多少？

比色法检测生物素/蛋白质摩尔质量比是多少？

比色法(colorimetry)是通过比较或测量有色物质溶液颜色深度来确定待测组分含量的方法。下面介绍比色法检测生物素/蛋白质摩尔质量比的具体步骤以及测算方法：

1.吸取900 ul　HABA/亲和素溶液于1ml比色杯。

2.测定该溶液在500 nm 处的吸收值并记录为“A500　HABA/Avidin”。

3.吸取100 ul 生物素标记的蛋白于杯中并测定500 nm 的吸光度值，记为A500　HABA/Avidin/Biotin （数值必须恒定15s 以上）如果A500　HABA/Avidin/Biotin的值不超过（≤）0.3，重新稀释待测样品并检测。

注：计算结果时必须考虑稀释度。

计算Biotin/Protein摩尔比：

①A=生物素化的蛋白毫摩尔浓度＝蛋白浓度（mg/ml）/蛋白的分子量

②B=500nm处的吸光度变化

△A500=（0.9×A500HABA/Avidin）-A500HABA/Avidin/Biotin

③C=生物素的毫摩尔浓度=mmol Biotin/ml反应溶液=△A500/（34,000×光程）

④Biotin/Protein摩尔比=C•10•稀释倍数/