EZH1介导的AML1-ETO赖氨酸43位甲基化修饰促进其在白血病中的转录抑制
EZH1介导的AML1-ETO赖氨酸43位甲基化修饰促进其在白血病中的转录抑制
研究背景
01
融合蛋白AML1-ETO(一个转录因子，简称AE)约存在于12％的急性髓系白血病（AML）成年患者中。AML1-ETO影响AML1依赖的基因的正常表达，导致造血紊乱。AML1-ETO招募共同作用因子（如p300乙酰转移酶）到目标基因启动子上，导致基因的抑制/激活。
02
前期研究表明，p300在AML1-ETO K43位发生乙酰化修饰，增强AML1-ETO的功能。p300失活仅部分破坏部分AML1-ETO的功能，表明存在其他相互作用的蛋白质/修饰来微调AML1-ETO在白血病中的作用。
03 一篇高分综述文章提示肿瘤进程中转录因子甲基化有重要作用[7]。
提出假设：
AML1-ETO是否有可能发生了甲基化修饰？
实验验证 AML1-ETO甲基化修饰初步验证 通过anti-ETO 抗体进行IP实验，然后用甲基化修饰泛抗体进行IB，结果发现AML1-ETO的确存在甲基化修饰。 图1 IP实验证明AE蛋白上存在甲基化修饰 AML1-ETO甲基化修饰发生蛋白区段确认 对蛋白进行分区，通过截短实验找出发生甲基化的蛋白区段。结果表明当NHR1删除后，甲基化修饰将无法被检测到，说明甲基化发生在NHR1区段。 图2 蛋白分区及截短实验 MS确认修饰位点 将蛋白IP后跑胶，再进行考染、切胶，经质谱分析确认肽段上K43位分子量偏移了14Da（一个甲基的大小），即甲基化修饰发生位点是K43位 。 图3 质谱检测分析图 氨基酸突变验证 作者将43位的赖氨酸K突变为精氨酸R（模拟去修饰），发现突变后甲基化修饰不能再被检测到。 图4 突变AE的K43后，甲基化修饰信号丢失 表1 常见氨基酸点突变验证策略 定制抗体确认 接下来，作者借助定制位点特异修饰抗体，对修饰位点进行再次确认，结果与甲基化泛抗体的结果一致。 图5.定制抗体确认AE蛋白K43位发生了甲基化修饰 确认了蛋白上存在甲基化修饰，作者结合其特点展开后续研究。 1. 甲基化修饰酶的确认: CoIP > EZH1与修饰酶互作与生化验证 2. 两种修饰的cross talk：两种修饰酶与底物AML1-ETO的竞争性结合 3. 甲基化修饰的生物学功能研究 小结 在本篇文章中，转录因子AE甲基化修饰贯穿全文，所有实验都围绕其展开，两种修饰的cross talk也为文章增色不少。
